1.莖尖愈傷組織培養(yǎng)
適宜的培養(yǎng)基為MS+6-BA3mg/L+NAA0.2 mg/L+白糖3.0%+瓊脂0.6%。 培養(yǎng)基pH值為5.8, 培養(yǎng)溫度18-25 ℃,每天光照12小時(shí),光照度2000lx,一般7天長(zhǎng)出第1個(gè)有效節(jié)。
2.繼代培養(yǎng)
將培養(yǎng)獲得的完整植株按有效節(jié)剪下,接種到繼代培養(yǎng)基上,適宜的繼代培養(yǎng)基為1/2MS+0.5 mg/L NAA+3.0%白糖+0.6%瓊脂。一般第9天產(chǎn)生第1個(gè)有效節(jié)。
3.生根培養(yǎng)
當(dāng)繼代培養(yǎng)長(zhǎng)出的無(wú)菌芽長(zhǎng)至3-5厘米高時(shí),轉(zhuǎn)移至1/2MS+1.0 mg/L IBA +2.0%白糖+0.7%瓊脂的培養(yǎng)基上生根培養(yǎng)。接種后10天左右可出現(xiàn)幼根,并可見(jiàn)到粗壯的塊根形成。
4.試管苗移栽
將形成粗壯塊根的試管苗移栽到溫室內(nèi)。栽培床上鋪有機(jī)質(zhì)含量較高的森林土或草甸土。培養(yǎng)溫度15-20 ℃, 土壤水分11%-13%。經(jīng)過(guò)120天左右待塊根發(fā)育成熟后移到大田栽培,當(dāng)年收獲種子。
5.大田栽培
按行株距0.333米× 0.125 米栽培。四周設(shè)保護(hù)行1米,分成不同的地塊。制定輪作方案,播前土壤經(jīng)過(guò)處理,以控制雜草危害,提高種子產(chǎn)量。
微孔草的組培,育苗時(shí)間安排上要與其生長(zhǎng)發(fā)育節(jié)律同步。如在6月中、下旬利用幼嫩的莖尖進(jìn)行組培,10月下旬或11月上旬轉(zhuǎn)移到溫室培養(yǎng)塊根,翌年4月上旬將塊根移入大田栽培,當(dāng)年收獲種子。這樣,在非生產(chǎn)季進(jìn)行組培擴(kuò)繁和溫室育苗,在生長(zhǎng)季生產(chǎn)種子,可使得田間生長(zhǎng)周期縮短1個(gè)生長(zhǎng)季。